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公司名称: 上海贝曼生物科技发展有限公司
公司地址: 上海市杨浦区五角丰达c座507
公司电话: 021-55218700
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如何合理使用酶联免疫试剂盒?酶联免疫试剂盒使用须知
发布时间:2018-05-23 阅读:119
上海贝曼生物科技发展有限公司常年供应酶联免疫试剂盒。酶免疫测定技术应用广泛,其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA(酶联免疫吸附试验)法有双抗体夹心法和间接法,前者用于检测大分子抗原,后者用于测定特异抗体。那么,该如何合理使用酶联免疫试剂盒呢?酶联免疫试剂盒使用须知如下:
一、酶联免疫试剂盒进行试验之前的准备工作
1、仔细阅读说明书,确定试剂盒在有效期内。
2、按说明书确定所有试剂是否齐全,完整的Sunny ELISA试剂盒包含预包被酶标板,检测抗体、链霉亲合素标记的HRP、标准品、标准品稀释液、TMB显色液、终止液、洗液等10个组分。另外要确认试剂盒以外的材料是否齐全,如酶标仪、移液器及枪头、加样槽、离心管、量筒、蒸馏水、稀释用聚丙烯试管等。
3、实验前,将试剂盒从冰箱中取出,室温放置半个小时,以让试剂恢复到室温。
4、将10×的检测缓冲液(Assay Buffer)稀释到1×,吸取10X浓缩Assay buffer 5mL至50mL离心管,加蒸馏水至 50Ml,震荡混匀备用。1×Assay buffer主要用于检测抗体、HRP等浓缩液的稀释。
5、将20×的洗涤液稀释到1×,吸取20X洗液50mL至1L量筒,加蒸馏水至1000Ml,混匀,转移至干净容器内备用,洗涤液用于实验中的洗涤步骤。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,可用37℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液,(加热温度不要超过50℃)使用时洗涤液应为室温。
二、酶联免疫试剂盒液体样本处理原则:
1、胸腹水:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟分配(2000-3000转/分),细心收集上清,保留过程中如有堆积构成,应再次离心。
2、血浆:应根据标本的央求挑选EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,2-8℃条件离心20分钟分配(2000-3000转/分),细心收集上清,保留过程中如有堆积构成,应当再次离心。
3、尿液:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟分配(2000-3000转/分)。细心收集上清,elisa酶联免疫试剂盒说明书保留过程中如有堆积构成,应再次离心。
4、脑脊液:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟分配(2000-3000转/分),细心收集上清,保留过程中如有堆积构成,应再次离心。
5、蜂蜜:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟分配(2000-3000转/分),细心收集上清,保留过程中如有堆积构成,应再次离心。
6、唾液:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟分配(2000-3000转/分),细心收集上清,保留过程中如有堆积构成,应再次离心。
7、血清:用无菌管收集,室温血液天然凝聚10-20分钟,2-8℃条件离心20分钟分配(2000-3000转/分),细心收集上清,保留过程中如出现堆积,应再次离心。
8、细胞培养上清:检查分泌性的成份时,用无菌管收集。2-8℃条件离心20分钟分配(2000-3000转/分),细心收集上清,保留过程中如有堆积构成,应再次离心。
9、牛奶:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟分配(2000-3000转/分),细心收集上清,保留过程中如有堆积构成,应再次离心。
三、酶联免疫试剂盒的操作方法
1、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
2、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
3、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
4、酶联免疫试剂盒每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
5、取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
6、在450nm波长处测定各孔的OD值。
四、酶联免疫试剂盒注意事项
1、合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。
2、显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。
3、加样时保持显色剂不外流;A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。
4、加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

 
 
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